目的：考察目前市場上常用總膽紅素試劑盒的檢驗方法。
方法：選取5個廠家生產(chǎn)的試劑盒(均為重氮法)，按其說明書要求分別用帶血清空白的終點法或不帶血清空白的終點法檢測其線性和準(zhǔn)確性。
結(jié)果：各試劑盒線性r＞0.99，準(zhǔn)確性在1%～10%波動。結(jié)論：使用終點法測定總膽紅素試劑盒，應(yīng)使標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化。
人紅細胞的壽命一般為120 d，紅細胞死亡后變成間接膽紅素（I-Bil），經(jīng)肝臟轉(zhuǎn)化為直接膽紅素（D-Bil），組成膽汁，排入膽道，zui后經(jīng)大便排出。間接膽紅素與直接膽紅素之和就是總膽紅素（T-Bil）。
上述的任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)障礙，均可使人發(fā)生溶血性黃疸、肝細胞性黃疸和阻塞性黃疸。肝炎患者的黃疸一般為肝細胞性黃疸，也就是說直接膽紅素與間接膽紅素均升高，而淤膽型肝炎的患者以直接膽紅素升高為主。總膽紅素的正常值為1.71～17.1 μmol/L(1～10 mg/L)，直接膽紅素的正常值為1.71～7 μmol/L(1～4 mg/L)。
因此，臨床上對于用測定血清總膽紅素來鑒別黃疸有較大意義，它對肝臟疾病診斷、治療和愈后判斷有重要價值。我們對總膽紅素試劑盒中試劑的線性和準(zhǔn)確性進行研究，不僅可以有效的節(jié)約原材料、降低生產(chǎn)成本、規(guī)范行業(yè)，對臨床檢驗的準(zhǔn)確性，也大有幫助。
1 儀器與試藥
半自動生化分析儀（SECOMAM公司生產(chǎn)，型號：BASIC）；總膽紅素測定試劑盒（選用五個廠家生產(chǎn)的，編號依次為1～5號，在這5個廠家生產(chǎn)的試劑盒中，只有兩個試劑盒即1號試劑盒和2號試劑盒中自帶標(biāo)準(zhǔn)品，其濃度分別為171 μmol/L和20 μmol/L）；總膽紅素標(biāo)準(zhǔn)液；多項液體生化質(zhì)控血清。
2 方法
2.1 實驗原理
重氮法：總膽紅素在二甲亞砜等加速劑作用下，在酸性溶液中與重氮苯磺酸作用生成紫色的偶氮膽紅素，與經(jīng)過同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)液比較，即可計算出樣品中膽紅素的含量。
2.2 試驗方法
2.2.1 線性關(guān)系取總膽紅素（T-Bil）高濃度樣本，通過采用樣品量加倍模式（高值血清低于線性范圍上*）或用生理鹽水稀釋成一系列濃度，zui高濃度應(yīng)大于或等于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定線性范圍上限值（5個試劑盒的加樣量及加樣方法詳見表1~ 5），每個濃度重復(fù)測定2次，取其吸光度平均值與對應(yīng)的理論濃度值進行回歸分析，求相關(guān)系數(shù)r。
2.2.2 準(zhǔn)確性取一定值血清（濃度為24.8 μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)液），按線性項下各表中定標(biāo)的加樣方式和試驗步驟進行測定，重復(fù)3次，取其均值計算偏差。然后按以下公式計算各樣品的檢測誤差。
誤差=( 測定值-24.81 /24.8)×100%
3 結(jié)果
3.1 線性
將試劑盒各濃度吸光度均值與其對應(yīng)的理論濃度回歸，計算回歸系數(shù)r值。
3.2 準(zhǔn)確性
檢測結(jié)果如表所示。
4 討論
總膽紅素標(biāo)準(zhǔn)品很不穩(wěn)定，根據(jù)線性結(jié)果來看，雖然相關(guān)系數(shù)r很好，但吸光度所得值或全部升高或全部降低，即吸光度的增加與其相應(yīng)的理論濃度不呈正比關(guān)系。在有些標(biāo)準(zhǔn)中要求所得值與理論值的偏差應(yīng)≤10%，如按這一要求來判定線性，總膽紅素的線性就遠遠達不到要求，所以考慮到總膽紅素試劑盒這一特殊性，在標(biāo)準(zhǔn)中不但要求r值，同時還應(yīng)要求所得值與理論值的偏差。
在分析方法學(xué)上，本次試驗采用的是一點定標(biāo)法。在做線性這一項目檢測時，由于總膽紅素試劑盒中說明書要求的試劑與標(biāo)準(zhǔn)液的比例較低，這就要求必須要用高濃度的標(biāo)準(zhǔn)液來定標(biāo)和做線性，但如果用高濃度的標(biāo)準(zhǔn)液定標(biāo)后，再做準(zhǔn)確性時，對準(zhǔn)確性的結(jié)果影響卻非常的大。如果在試驗中用高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品定標(biāo)做線性，再用低濃度的標(biāo)準(zhǔn)液定標(biāo)做準(zhǔn)確性，這樣得出的結(jié)果雖好，但卻也失去了檢測的意義。對于很多診斷試劑來說，因為考慮到操作簡便，標(biāo)準(zhǔn)曲線法基本上是一個被淘汰了的方法。
總膽紅素濃度在171 μmol/L以內(nèi)線性良好，高于此值時可用生理鹽水將血清稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)，且總膽紅素在10～37℃范圍內(nèi)測定不受溫度變化的影響，呈色在2 h內(nèi)非常穩(wěn)定。在實驗中雖然都用的是終點法且反應(yīng)原理一樣，但有些帶血清空白，有些又不用帶血清空白。因為在試驗前都是要清除試劑空白，血清空白對結(jié)果到底有怎樣的影響還值得研究。
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