標(biāo)本因素對(duì)ELISA測(cè)定的影響
 

    ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定，具有靈敏度高，操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，但是在具體實(shí)驗(yàn)過程中影響因素較多，并且要按照嚴(yán)格的說明要求，在臨床檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外，有時(shí)?？梢姷揭恍╁e(cuò)誤結(jié)果（即假陽性或假陰性結(jié)果）。
    引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素。本文就標(biāo)本因素對(duì)ELISA測(cè)定的影響做如下討論。
 

    人elisa試劑盒血清是zui常用的ELISA標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致。
    內(nèi)源性物質(zhì)
    普遍認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測(cè)結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig（s）抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
 

   （1）類風(fēng)濕因子
    人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽性。解決該情況的辦法是：①用F（ab）2替代完整的IgG；②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）；③檢測(cè)抗原時(shí)，可以用等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。
 

    （2）補(bǔ)體
    ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來，使C1q可以將二者
    連接起來，從而造成假陽性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標(biāo)本；②用53℃，10min或56℃，30min加熱血清使C1q滅活。
 

    （3）嗜異性抗體
    人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物（如鼠等）Ig（s）結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物Ig（s），但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。
 

    （4）嗜靶抗原的自身抗體
    抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn)，解決的辦法是：測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。
 

    （5）醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig（s）抗體
    臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù)，均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體；另外，被鼠等嚙齒類動(dòng)物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig（s）抗體。這些病人ELISA測(cè)定時(shí)均可產(chǎn)生假陽性。解決的辦法是：測(cè)定抗原時(shí)，在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig（s），從而克服由于上述原因造成的假陽性。
 

   （6）交叉反應(yīng)物質(zhì)
    類digaoxin、類AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測(cè)定抗原時(shí)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大，但在用單克隆抗體測(cè)定抗原時(shí)，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對(duì)應(yīng)的靶決定簇時(shí)，也會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
 

   （7）標(biāo)本中其它成分的影響血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等，均對(duì)ELISA測(cè)定結(jié)果有干擾作用。